将新鲜分离的5×10⁶个单个核细胞接种至T25培养瓶中，培养瓶内加入6mL NK 细胞扩增培养基（加入NK细胞活化剂），600ul热灭活自体血浆（所占比例为培养基体积的10%），同时加入12ul NK 细胞激活剂（每ml培养基2ul激活剂）。放入培养箱内（条件为37℃，5%CO2）进行培养。第 3 天，显微镜下观察细胞状态，若细胞已开始形成克隆团，进行等体积补液（6ml NK细胞扩增培养基，600ul热灭活自体血浆）。D5天起，每两天进行1次取样计数，根据细胞的密度（调整NK细胞密度为每ml1.0-1.5×10⁶个）决定补加NK 细胞扩增培养基的量，此时血浆浓度可降为5%。D7天之后，所加培养基内的热灭活自体血浆浓度可以降低到1%。14天为1个培养周期。