1.2.3 细胞转染和单克隆细胞的获得将Lipo2000 转染试剂和DMEM 混合，重组质粒HS015A–RBBP4与DMEM(Gibico) 混合，室温孵育5 min。再将Lipo2000 转染试剂混合物与重组质粒混合物混合，室温孵育30 min。分别消化HEG2和L02细胞，按一定密度接种于6 孔板中，加入孵育完的转染试剂、重组质粒混合物。转染8 h 后换液，培养2-3天后提取细胞蛋白及RNA。

1.2.4 Western blot 检测RBBP4的表达

收集野生型HEPG2和L02细胞和转染的显绿色荧光的细胞，用RIPA 裂解细胞，收集全细胞提取物，离心取上清作为样品，用野生型的细胞蛋白作对照。测定样品蛋白浓度，经蛋白变性后调整为相同蛋白浓度，本实验均为5ug/ul，取等量蛋白样品。进行SDS-PAGE 电泳，经半干转印至NC 膜后，5%脱脂牛奶封闭，一抗、二抗孵育，加入曝光底物进行曝光。以GAPDH为内参，Western bloting 法检测RBBP4蛋白在细胞中的表达情况，比较野生型细胞和RBBP4敲除细胞中RBBP4蛋白的表达差异。