完全培养基重悬细胞并计数
更新日期:2022-06-01     浏览次数:204
核心提示:1. 细胞增殖实验A549细胞在含10% FBS的RPMI-1640培养基中培养,经0.25%胰酶消化后,于800 rpm离心5 min,然后用完全培养基重悬细胞并计数,其中每孔

   1. 细胞增殖实验  A549细胞在含10% FBS的RPMI-1640培养基中培养,经0.25%胰酶消化后,于800 rpm离心5 min,然后用完全培养基重悬细胞并计数,其中每孔接种1000个细胞,于培养箱中分别培养5天。在96孔板的每个孔中加入10μl MTT,于培养箱中孵育4 h后,弃去MTT和完全培养基,然后加入100 μl DMSO,于培养箱中孵育10 min,中间去除摇晃一次,然后于酶标仪(TECAN Nanoquant,Switzerland)中检测各孔在490nm处的吸光光度值。上述培养条件均为 37℃、5%CO2加湿培养箱。

    2. 细胞迁移实验 取对数生长期细胞,调整细胞密度为1×105/ml,将Transwell小室放入24孔培养板中,在小室外加入含10%FBS完全培养液或1%FBS培养液(作为对照组),小室内接种1×104细胞,37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中孵育6小时,PBS漂洗后, Cooomassieblue室温染色适当时间。倒置显微镜下×10物镜计数贴附于小室多孔膜上的总细胞数 (N0),棉签擦去小室多孔膜上方细胞,计数残留在小室多孔膜下方的细胞数(N1),每一张膜随机选取5个视野拍照并进行统计。按以下公式计算细胞迁移率:细胞迁移率=Nl/N0×100%。