(1)实验动物分组:健康新西兰大白兔15只,适应性喂养1周后死亡3只,其余按随机数字表法分为生骨再造丸血清组(8只)和空白血清组(4只)。
(2)实验细胞分组:课题组前期实验中提取的各动物实验组冻存BMSCs,将其分别复苏培养后,分为空白组(自行提取正常组的实验兔细胞,记为空白组)、模型组(自行提取造模组的实验兔细胞,记为模型组)、模型+药物组(采用含药血清干预模型组细胞,记为组)、模型组+PI3K通路激动剂(采用通路激动剂干预模型组细胞,记为模型+激动剂组)、模型组+PI3K通路抑制剂(采用通路抑制剂干预模型组细胞,记为模型+抑制剂组)。
1.6血清制备
根据本课题组前期实验结果表明,生骨再造丸治疗SANFH兔最佳灌胃剂量为2.4g/kg,各组精准称重后,生骨再造丸血清组以2.4g/kg剂量对SANFH兔进行灌胃治疗,给予空白血清组与生骨再造丸血清组等体积的生理盐水灌胃。将2组新西兰大白兔连续灌胃4周后,采集血液,离心取上清灭活,用0.22µm滤膜抽滤除菌,滤后分装置于-20℃保存备用。